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小鼠脾臟單細胞分離

簡要描述:小鼠脾臟單細胞分離:單細胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個細胞進行培養獲得純培養的方法。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細介紹


1 物理方法
又稱機械法,分為3種:(1)研磨法,即通過簡單研磨后過濾去除雜質。本法一般針對脆性較大的組織,雖簡單易行,但對細胞損傷較大,且經過濾獲得的細胞純度不高;(2)振蕩法,即通過振蕩后過濾獲得細胞懸液,一般針對細胞間聯接不是非常緊密的組織;(3)直接分離法:本法所得細胞產量較高,形態完整,分散度好,雜質少,但活性與功能較差,且隨著培養時間的延長,活性及功能逐漸下降,不適于一些持續時間較長的實驗研究。
2 化學方法
又稱鰲合法,即利用一些特殊的化學試劑破壞細胞間的聯接。Ca2+、Mg2+等在細胞間橋粒聯接中起重要作用,鰲合劑(EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等)結合了這些離子后,可使橋粒聯接斷開,有利于細胞分離。本法單獨使用效果較差,常與酶消化法結合使用。
3 生物方法
使用普遍的是酶消化法,即利用特定的酶溶液溶解、破壞細胞間蛋白聯接,是目前分離獲取游離組織細胞常用的方法。根據不同細胞不同的蛋白聯接應選用不同的酶種類。膠原蛋白在高等動物機體中含量豐富,是動物和人體皮膚、血管.骨胳等組織的主要基質,故常用的是膠原酶法。膠原蛋白有很多種類型,其對應的酶也各不相同。位于基底膜的第IV型膠原蛋白是維持細胞養分和其他正常代謝的重要關鍵,故破壞此蛋白一般即可達到分離的目的。

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